1、食品安全問題主要有害污染物(wù):

（1）農藥,化肥:有機磷,有機氯，硝酸鹽

（2）獸藥：興奮劑，鎮靜劑，抗生(shēng)素

（3）重金屬離(lí)子：镉，鉛，汞，鉻，砷，钼

（4）生(shēng)物(wù)毒素：黃曲黴毒素，嘔吐毒素，肉毒素

（5）緻病菌：大(dà)腸杆菌，沙門氏菌，葡萄球菌等

2、 快速檢測含義：

包括樣品制備在内，能夠在短時間内出具檢測結果的行爲稱之爲快速檢測。

三方面體(tǐ)現

（1）實驗準備要簡化

（2）樣品經簡單前處理後即可測試，後采用先進快速的樣品處理方式

（3）分(fēn)析方法簡單，快速，準确

3、食品安全快速檢測分(fēn)類：

1）按分(fēn)析地點：現場快速檢測，實驗室快速檢測

2）按定性定量：定性快速篩選檢驗，半定量檢驗，全量檢驗

4、農藥殘留檢測方法：

 (一(yī))生(shēng)物(wù)法：

（1）生(shēng)物(wù)化學測定法(酶抑制率法，速測卡法)

（2）分(fēn)子生(shēng)物(wù)學方法(如：ELISA)

（3）活體(tǐ)生(shēng)物(wù)測定法(發光細菌，大(dà)型水藻，家蠅)

（4）生(shēng)物(wù)傳感器法

 (二)化學方法 酶抑制法 酶聯免疫檢測法

5、免疫定義：

機體(tǐ)識别自身非自身，并清除非自身大(dà)分(fēn)子物(wù)質，從而保持機體(tǐ)内外(wài)環境平衡的一(yī)種生(shēng)理反應

6、 免疫基本特征：

識别自身和非自身，特異性，免疫記憶

7、免疫的基本功能：

抵抗感染，自身穩定，免疫監視

8、抗原定義：

能刺激機體(tǐ)産生(shēng)免疫答應，并且能與答應物(wù)(抗體(tǐ)或效應性淋巴細胞)特異性結合的物(wù)質，稱爲抗原(Antigen，Ag)

9、抗原具有抗原性：

免疫原性，反應原性

10、抗原分(fēn)類(按抗原性質)：

完全抗原，半抗原(某些藥物(wù))

11、抗原表位，又(yòu)稱抗原決定簇：

是位于抗原物(wù)質分(fēn)子表面或者其他部位的具有一(yī)定組成和結構的特殊化學基團

12、抗體(tǐ)：

有抗原刺激動物(wù)的免疫系統後，由免疫系統B細胞增殖分(fēn)化爲漿細胞所産生(shēng)，分(fēn)泌的一(yī)類能與相應抗原特異性結合的具有免疫功能的球蛋白(bái)。并非所有的免疫球蛋白(bái)都是抗體(tǐ)

13、抗體(tǐ)基本結構：

a.重鏈H 2條 輕鏈L 2條

b.恒定區C區 可變區V區

c.鉸鏈區d.Fab抗原結合片段Fc：可結晶片段

14、ELISA的原理：

（1）抗原或抗體(tǐ)能以物(wù)理性吸附于固相載體(tǐ)表面，可能是蛋白(bái)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分(fēn)相互吸附，并保持其免疫學活性

（2）抗原或抗體(tǐ)可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物(wù),而此種酶結合物(wù)仍能保持其免疫學和酶學活性

（3）酶結合物(wù)與相應抗原或抗體(tǐ)結合後,可根據加入底物(wù)的顔色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顔色反應的深淺是與标準中(zhōng)相應抗原或抗體(tǐ)的量成一(yī)定比例的,因此,可以按底物(wù)顯色的程度顯示實驗結果

15、ESISA的類型:

（1）雙抗夾心法(測微生(shēng)物(wù))

（2）間接法測抗體(tǐ)

（3）競争法測抗原(化肥農藥)

16、雙抗體(tǐ)夾心法基本原理:

利用連接于固相載體(tǐ)上的抗體(tǐ)和酶标抗體(tǐ)分(fēn)别與樣品中(zhōng)被檢測抗原分(fēn)子上兩個抗原決定簇結合，形成固相抗體(tǐ)-抗原-酶标抗體(tǐ)免疫複合物(wù)，由于反應系統中(zhōng)固相抗體(tǐ)和酶标抗體(tǐ)的量相對于待測抗原是過量的，因此複合物(wù)的形成量與待測抗原的含量成正比(在方法可檢測範圈内),測定複合物(wù)中(zhōng)的酶作用于加入的底物(wù)後生(shēng)成的有色物(wù)質量(OD值) ，即可确定待測抗原含量

17、間接法測抗體(tǐ)基本原理:

将抗原連接到固相載體(tǐ)上，樣品中(zhōng)待測抗體(tǐ)與之結合成固相抗原-受檢抗體(tǐ)複合物(wù)，再用酶标二抗(針對案檢抗體(tǐ)的抗體(tǐ)，如羊抗人ICG抗體(tǐ))與固相免疫複合物(wù)中(zhōng)的抗體(tǐ)結合，形成固相抗原-受檢抗體(tǐ)-酶栝二抗複合物(wù)，測定加底物(wù)後的顯色程度，測定待測抗體(tǐ)含量

18、競争法測抗原基本原理：

首先将特異性抗體(tǐ)吸附于固相載體(tǐ)表面(包被)，經洗滌後分(fēn)成兩組：一(yī)組加酶标記抗原和被測抗原的混合液，而另一(yī)組隻加酶标記抗原，标本中(zhōng)的抗原和一(yī)定量的酶标抗原競争與固相抗體(tǐ)結合(标本中(zhōng)抗原量含量愈多，結合在固相上的酶抗原愈少，最後的顯色也愈淺)，再經孵育洗滌後加底物(wù)顯色，兩組底物(wù)降解量之差，即爲我(wǒ)們所要測定的未知(zhī)抗原的量

19、農藥殘留生(shēng)物(wù)化學測定方法：

（1）農藥速測卡法

（2）農藥殘留分(fēn)光光度法(抑制率法)

20、速測卡法檢測原理：

膽堿醋酶可催化靛酚乙酸酮(紅色)水解爲乙酸與靛酚(藍(lán)色)有機磷或氨基甲酸脂類農藥對膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解，變色的過程發生(shēng)改變，由此判斷樣品中(zhōng)是否含有過量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的殘留

分(fēn)析步驟：

A.提取：幹淨的菜樣品---剪碎(1CM左右見方)---取5g于帶蓋瓶中(zhōng)---加純淨水或緩沖溶液(l0mL)---震搖(50次)---靜置(2min以上)

B.預反應：取一(yī)片速測卡，用白(bái)色藥片沾取提取液，放(fàng)置10min以上進行預反應，有條件時在37℃恒溫裝放(fàng)置中(zhōng)10min.預反應後的藥片表面必須保持濕潤

C.反應：将速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白(bái)色藥片疊合發生(shēng)反應 d.每批測定應設一(yī)個純淨水或緩沖液的空白(bái)對照卡

21、速測卡法結果判定：

與空白(bái)對照卡比較，白(bái)色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均爲陽性結果，不變藍(lán)爲陽性結果，說明農藥殘留量較高，顯淺藍(lán)色爲弱陽性結果，說明農藥殘留量相對較低。白(bái)色藥片變爲天藍(lán)色或空白(bái)對照卡片相同，爲陰性結果。對陽性結果的樣品，可用其他分(fēn)析方法進一(yī)步确定具體(tǐ)農藥品種和含量

22、農藥殘留分(fēn)光光度計法(抑制率法)原理：

一(yī)定條件下(xià)，有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農藥的濃度成正相關.，正常情況下(xià)，酶催化乙酰膽堿水解，其水解産物(wù)與顯色劑反應，産生(shēng)黃色物(wù)質，用分(fēn)光光度計在412nm處測定發光度随時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中(zhōng)是否有有機磷确和氨基甲酸酯類農藥的存在

23、酶傳感器：

它将活性物(wù)質酶覆蓋在電極表面，酶與被測的有機物(wù)或無機物(wù)反應，形成一(yī)種能被電極響應的物(wù)質

24、生(shēng)物(wù)傳感器在食品分(fēn)析中(zhōng)的應用：

（1）食品成分(fēn)分(fēn)析

（2）食品添加劑的分(fēn)析

（3）農藥和抗生(shēng)素殘留量分(fēn)析

（4）微生(shēng)物(wù)和生(shēng)物(wù)毒素的檢驗

（5）食品限度的檢驗

25、蔬菜中(zhōng)硝酸鹽含量的快速測定原理：

将NO3-還原N02-後，芳香胺與亞硝酸根離(lí)子發生(shēng)重氮化反應，生(shēng)成重氮鹽，重氮鹽再與芳香族化合物(wù)發生(shēng)偶聯反應，生(shēng)成一(yī)種紅顔色偶氮化合物(wù)(偶氮染料)，其顔色強度與硝酸鹽含量呈正比，通過試紙(zhǐ)由無色變爲紅色，變色的試紙(zhǐ)放(fàng)入基于光學傳感器原理的硝酸鹽檢測儀中(zhōng)比色測定硝酸鹽含量。儀器與材料：硝酸鹽試紙(zhǐ). 快速測定儀

26、硝酸鹽速測管

（1）适用範圍：乳品、飲用水、蔬菜等食物(wù)中(zhōng)硝酸鹽的快速檢測

（2）方法原理：按照國标GB/T5009. 33鹽酸蔡乙二胺顯色原理，在格林試劑中(zhōng)加入硝酸鹽轉化劑，并将其做成速測管，速測管中(zhōng)的試劑可将N03-還原爲N02-後，再與芳香胺(氨基苯磺酸) 發生(shēng)重氮反應，生(shēng)成重氮鹽，重氮鹽再與芳香族化合物(wù)( A-祭胺)發生(shēng)偶聯反應，生(shēng)成紅色偶氮化合物(wù)(又(yòu)叫偶氮染料)，顔色深淺與硝酸鹽含量成正比，與标準色卡比對，确定硝酸鹽含量

27、獸藥殘留定義：

動物(wù)産品的任何可食部分(fēn)所含獸藥的母體(tǐ)化合物(wù)及其代謝物(wù)，以及與獸藥有關的雜(zá)質殘留

28、獸藥殘留快速檢測微生(shēng)物(wù)法檢測原理：

檢測管中(zhōng)的培養基預先接種了嗜熱脂肪芽孢杆菌，并含有細菌生(shēng)長所需的營養以及pH指示劑。隻需加入100ul樣品于檢測管中(zhōng)

将含有樣品的檢測管放(fàng)入64±1℃水浴中(zhōng)加熱一(yī)段時間。奶或奶制品在培養基中(zhōng)迅速擴散，若該樣品中(zhōng)不含有抗生(shēng)素(或者抗生(shēng)素低于檢測值)，嗜熱脂肪芽孢杆菌将在培養基中(zhōng)生(shēng)長，葡萄糖呗分(fēn)解後所産生(shēng)的酸會改變Ph指示劑顔色，由紫色變爲黃色。相反若高于檢測限的抑菌劑，則嗜熱脂肪芽孢杆菌不會生(shēng)長，指示劑顔色不變 仍爲紫色

黃色表明該樣品沒有抗生(shēng)素殘留或抗生(shēng)素殘留的含量低于試劑盒的檢測限(陰性) 紫色表明該樣品中(zhōng)含有抗生(shēng)素殘留 且濃度高于試劑盒的檢測限(陽性) 如果介于黃色紫色之間，則說明該樣品可能不含抗生(shēng)素殘留或者抗生(shēng)素殘留的含量低于試劑盒的檢測限(部分(fēn)陽性)

29、膠體(tǐ)金概念：

氯金酸在還原劑作用下(xià)，可聚合成一(yī)定大(dà)小(xiǎo)的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成爲穩定的膠體(tǐ)狀态

30、免疫金标記技術原理：

膠體(tǐ)金顆粒表面負電荷與蛋白(bái)質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。膠體(tǐ)金對蛋白(bái)質有很強的吸附功能，蛋白(bái)質等高分(fēn)子被吸附到膠體(tǐ)金顆粒表面，無共價鍵形成，标記後大(dà)分(fēn)子物(wù)質活性不發生(shēng)改變。金顆粒具有高電子密度的特性。金标蛋白(bái)在相應的配體(tǐ)處大(dà)量聚集時，在顯微鏡下(xià)可見黑褐色顆粒或肉眼可見紅色或粉紅色斑點

31、放(fàng)射免疫測定法原理：

放(fàng)射免疫RIA：以标記抗原與反應系統中(zhōng)未标記抗原競争結合特異性抗體(tǐ)來測定的待檢樣品中(zhōng)抗原量。免疫放(fàng)射IRMA：以過量标記抗體(tǐ)與抗原非競争結合，采用固相免疫吸附載體(tǐ)分(fēn)離(lí)遊離(lí)和結合标記抗體(tǐ)。其他：放(fàng)射受體(tǐ)分(fēn)析RRA;放(fàng)射配體(tǐ)結合分(fēn)析RBA

32、RRA檢測食品中(zhōng)抗生(shēng)素殘留的原理：

1、每類抗生(shēng)素族均是在一(yī)個母環基礎上用不同功能團修飾星辰特定功效的抗生(shēng)素

2、微生(shēng)物(wù)細胞表面都存在着能與各種抗生(shēng)素功能基團結合的特異受點。結合反應是在标記的靶參考物(wù)與無标記的待測藥物(wù)之間競争進行的

33、競争性檢測原理：

使用一(yī)種具有吸附所有β-内酰胺藥物(wù)的特殊受體(tǐ)細菌，該細菌同14c标記的特定量青黴素G一(yī)起加入牛奶樣品。牛奶樣品中(zhōng)的任何一(yī)種β-内酰胺類均能和這種特殊标記的青黴素G競争性地與細菌cell上的特異性受體(tǐ)結合

34、毒鼠強快速檢測原理：

毒鼠強可以與二羟基萘二磺酸發生(shēng)反應變爲淺紫紅色，檢出限1ug，最低檢出濃度2ug/ml 濃度高時變爲深紫紅色

35、鼠藥氟乙酰胺的快速檢測速測管法檢測原理：

氟乙酰胺與奈氏試劑反應後會出現黃紅或棕色沉澱。最低檢出濃度10ug/ml

36、敵鼠鈉鹽的快速檢測原理：

敵鼠化學名爲2-(二苯基乙酰胺)-2，3二氫-1，3-茚三酮，可與三氯化鐵反應出現磚紅色

37、砷的快速檢測原理：

三氧化二砷與鋅粒和酸産生(shēng)的新形态氫生(shēng)成AsH3，其與氯化金相遇産生(shēng)反應，可使氯化金矽膠柱變成紫紅或灰紫色，在裝有氯化金矽膠的柱中(zhōng)砷含量與變色的長度成正比，以此可達到半定量的目的

38、砷 銻 铋 汞 銀化物(wù)的快速檢測方法：

 “雷因須氏

39、 亞硝酸鹽的快速檢測方法原理：

按國标鹽酸萘乙二胺顯色原理做成的速測管，與标準色卡對比定量

40、酒醇儀測定甲醇的檢測原理：

在20℃時，不同濃度的乙醇具有固定的折光率，當甲醇存在時，折光率會随着甲醇濃度的增加而降低，下(xià)降值與甲醇的含量成正比

按照這一(yī)現象而設計的酒醇含量速測儀，可快速顯示出樣品中(zhōng)酒醇含量。當這一(yī)含量與玻璃浮計測定出的酒醇含量出現差異時，其差值即爲甲醇含量。在20°時可直接定量，在非20°時，采用與樣品相當濃度的乙醇對照液進行對比定量

41、水法水産品中(zhōng)甲醛的快速檢測原理：

在堿性條件下(xià)，甲醛與間苯三酚反應後使溶液出現橙紅色特征。由于此方法的靈敏程度較低，水産品本底存在的甲醛很難參與反應。當人爲加入甲醛時，本方法可迅速檢測出來

42、變質肉類的快速檢測原理：

畜禽肉變質後或病害肉，其肉體(tǐ)内的揮發性鹽基氮、ph值以及過氧化物(wù)酶都會發生(shēng)改變。測試酸堿度，可初步反映出其新鮮程度;測試揮發性鹽基氮，可判斷是否新鮮或腐敗;測試過氧化物(wù)酶，可初步判斷是否是病害肉

43、牛乳中(zhōng)尿素的快速檢測原理：

尿素能夠阻斷萘胺試劑反應，不會生(shēng)成紫紅色物(wù)質。由此證明乳品中(zhōng)含有尿素成分(fēn)。檢出限牛乳濃度50mg/kg;乳粉濃度500mg/kg

44、乳品中(zhōng)澱粉和麥芽糊精的快速檢測原理：

麥芽糊精或澱粉與組合碘試劑發生(shēng)反應産生(shēng)棕色、紫色或棕紫色化合物(wù)

45、乳品中(zhōng)pro含量的快速檢測原理：

考馬斯亮藍(lán)試劑在遊離(lí)狀态下(xià)呈紅色，當它與pro結合後變成青色，其顔色深度與pro含量成正比。檢測範圍：液體(tǐ)樣品爲0.5g-20g/100g，固體(tǐ)樣品爲1g-40g/100g

46、米面粉中(zhōng)吊白(bái)塊的快速檢測方法：

甲醛 二氧化硫 原理：甲醛次硫酸氫鈉在食物(wù)中(zhōng)分(fēn)解成甲醛、次硫酸氫鈉和so2.甲醛與AHMT試劑反應生(shēng)成紫色化合物(wù)，檢出限爲0.05ug

47、水溶性非食用色素的快速檢測原理：

水溶性非食用色素與脫脂羊毛染色後不易去(qù)除的原理對部分(fēn)水溶性非食用色素進行檢測

48、味精谷氨酸鈉的快速檢測原理：

利用谷氨酸鈉的兩性作用，加入甲醛固定谷氨酸鈉的堿性，使羟基顯示出酸性，用氫氧化鈉标準溶液滴定，以指示劑顯示爲終點，得出樣品中(zhōng)谷氨酸鈉的含量

49、黃曲黴毒素：

AF是一(yī)類化學結構類似的化合物(wù)，均爲二氫呋喃環和香豆素的衍生(shēng)物(wù)。目前已發現20多種。B1是最危險的緻癌物(wù) 熒光特性 ：紫外(wài)線下(xià) B1 B2 發藍(lán)色熒光G1G2發綠色熒光

50、 黃曲黴毒素AF的快速檢測技術：

免疫親和柱-熒光分(fēn)光光度計法和免疫親和柱-HPLC法

 (1)分(fēn)析原理：免疫親和柱使用大(dà)劑量的黃曲黴毒素的單克隆抗體(tǐ)固化在水不溶性的載體(tǐ)上，然後裝柱而成。試樣中(zhōng)AF用一(yī)定比例的甲醇/水提取，提取液經過過濾稀釋後，用免疫親和柱淨化，以甲醇将親和柱上的黃曲黴毒素淋洗下(xià)來，在淋洗液中(zhōng)加入溴溶液衍生(shēng)，以提高測定靈敏度，然後用熒光分(fēn)光光度計進行定量。也可以将甲醇-黃曲黴毒素淋洗液的一(yī)部分(fēn)加入HPLC中(zhōng)，對黃曲黴毒素B1B2G1G2分(fēn)别進行定量分(fēn)析

 (2)ELISA法測定黃曲黴毒素B1 原理：将已知(zhī)抗原吸附在固态載體(tǐ)表面，洗除未吸附抗原，加入一(yī)定量抗體(tǐ)與待測樣品提取液的混合液，競争培養後，在固相載體(tǐ)表面形成抗原抗體(tǐ)複合物(wù)，洗除多餘抗體(tǐ)成分(fēn)，然後加入酶标記對抗球蛋白(bái)的第二抗體(tǐ)結合物(wù)，與吸附在固體(tǐ)表面的抗原抗體(tǐ)複合物(wù)結合，再加入酶的底物(wù)。在酶催化下(xià)底物(wù)降解，産生(shēng)有色物(wù)質，通過酶标檢測儀測出酶底物(wù)的降解量。推出被測樣品中(zhōng)抗原量

抗體(tǐ)：抗黃曲黴毒素B1的特異性單克隆抗體(tǐ)或抗血清包被抗原：黃B1與載體(tǐ)蛋白(bái)結合物(wù) 酶标二抗：羊抗鼠IgG與辣根過氧化酶結合物(wù) 3.微柱篩選法：原理:樣品提取液通過由氧化鋁與矽鎂吸附劑組成的微柱層析管，雜(zá)質被氧化鋁吸附，黃曲黴毒素被矽鎂吸附劑吸附，在波長365nm紫外(wài)燈下(xià)顯示藍(lán)紫色熒光環，其熒光強度與黃曲黴毒素在一(yī)定的濃度範圍内成正比例關系.若矽鎂型吸附層未出現藍(lán)紫色熒光，則樣品爲陰性(方法靈敏度爲5~10ug/kg )。由于在微柱上不能分(fēn)離(lí)黃曲黴毒素B1，B2，GI，G2，所以測得結果爲總黃曲黴毒素含量

51、 細菌毒素：

内毒素 外(wài)毒素 比較 ：産生(shēng)方式：内：細菌崩解後釋放(fàng) 外(wài)：合成分(fēn)泌到菌體(tǐ)外(wài) 化學成分(fēn)：内：脂多糖LPS 外(wài)：蛋白(bái)質

52、間接凝集試驗定義：

将可溶性抗原或抗體(tǐ)吸附于一(yī)種與免疫無關的，适當大(dà)小(xiǎo)的載體(tǐ)微粒表面，再與相應抗體(tǐ)或可溶性抗原在适宜條件下(xià)相互作用，經一(yī)定時間後出現的肉眼可見的凝集現象

53、食品中(zhōng)微生(shēng)物(wù)快檢方法：

1）基于微生(shēng)物(wù)代謝特征的檢測方法

2）改良培養基法

3）細菌直接計數法

4）免疫學快速檢測技術

5）分(fēn)子生(shēng)物(wù)學快速檢測技術

6）自動化檢測技術

7）生(shēng)物(wù)傳感器檢測技術

54、ATP生(shēng)物(wù)發光法 檢測原理：

熒光素+ATP+O2 (上：Mg2+)—→(下(xià)：熒光素酶)氧化型熒光素+AMP+PPI+H20

55、阻抗測定法原理：

當培養基中(zhōng)因微生(shēng)物(wù)的代謝活動而發生(shēng)化學改變時，阻抗也随着改變

56、溶氧——電流法檢測原理：

應用的是氧氣電極法的原理。在測量開(kāi)始時氧氣溶解在培養基中(zhōng)，随着細菌的生(shēng)長和繁殖，這些溶解氧不斷被消耗。DOX系統通過檢測與溶解氧量成比例的電流值來計算所含菌落總數，大(dà)腸菌群值

57、微量量熱法：

是利用細菌生(shēng)長時産生(shēng)熱量的原理設計而成，微生(shēng)物(wù)在生(shēng)長和代謝的過程中(zhōng)，能産生(shēng)大(dà)量的代謝熱。由于各種微生(shēng)物(wù)的代謝産物(wù)熱效應不同，因此可顯示出特異性的熱效應曲線圖。在細菌生(shēng)長過程中(zhōng)，用微量量熱計測量産熱量等熱數據，經過計算機處理，繪制出以産熱量對比時間組成的熱曲線圖，以此推斷細菌存在的數量

58、放(fàng)射測量法：

利用細菌在代謝碳水化合物(wù)時産生(shēng)CO2的原理，把微量的放(fàng)射性标記引入葡萄糖或者其他糖分(fēn)子中(zhōng)。細菌生(shēng)長時，糖被利用并放(fàng)出标記的CO2，将生(shēng)成的放(fàng)射性CO2從培養裝置中(zhōng)導出，利用專用的測量儀來測定CO2量，放(fàng)射量與細菌數成正比

59、快速測試片法原理：

由上下(xià)兩層組成，上層的薄膜上通過粘合劑結合了指示劑，并塗覆了冷水可溶性凝膠，下(xià)層的紙(zhǐ)片上塗覆了改良的培養基，并印有方格以便于計數。它是一(yī)種與限制備好的培養基系統，以每系統1ML的加樣量将樣品直接加到薄膜中(zhōng)間，蓋上含有膠凝劑和指示劑的覆蓋膜，培養後細菌在雙層膜之間生(shēng)産，其代謝産物(wù)與顯色物(wù)質作用并顯色，即可直接計數

60、顯色培養基：

是一(yī)類利用微生(shēng)物(wù)自身代謝産生(shēng)的酶與相應顯色底物(wù)反應顯色的原理來檢測微生(shēng)物(wù)的新型培養基。這些相應的顯示底物(wù)是由産色基團和微生(shēng)物(wù)部分(fēn)可代謝物(wù)質組成，在特異性酶的作用下(xià)，遊離(lí)出産色基團顯示一(yī)定顔色，直接觀察菌落顔色即可對菌種作出鑒定。優點：将菌株分(fēn)離(lí)，鑒定結合在一(yī)起，無需對菌株進行分(fēn)離(lí)純化和進一(yī)步生(shēng)化鑒定，**節約樣品的分(fēn)析檢測時間

61、固相細胞計數spc原理：

可以在單個細胞水平對細菌進行快速檢測。用特殊濾膜濾過樣品後，存留在濾膜上的微生(shēng)物(wù)用熒光素進行熒光染色，用落射熒光顯微鏡對每個螢光點進行直觀地檢測尤其對生(shēng)長緩慢(màn)的微生(shēng)物(wù)，檢測用時短，明顯優于傳統平闆計數法

62、流式細胞儀的基本原理：

A2待測細胞被制成單細胞懸液，經特異性熒光染料染色後加入樣品管中(zhōng)，在氣體(tǐ)壓力下(xià)進入流式細胞儀的流動室B 2流動室内充滿鞘液，鞘液和細胞懸液組成的細胞液柱一(yī)起自流動室噴嘴口**出來，進入測量區，與水平方向的激光光束垂直相交。C2被熒光染料染色的cell受到激烈激光照射後熒光，同時産生(shēng)散射光，熒光強度和被測cell中(zhōng)cell成分(fēn)與熒光燃料的結合程度有關，散射光強度一(yī)般與cell大(dà)小(xiǎo)成正比，D2将cell發出的熒光信号和散射光信号通過熒光光電倍增管接受，積分(fēn)放(fàng)大(dà)反轉化爲電子信号輸入電子接收儀，通過計算機将數據計算出來。多參數分(fēn)析實現cell的定量分(fēn)析，估計微生(shēng)物(wù)大(dà)小(xiǎo)形狀和數量

63、多聚酶鏈式反應PCR ：

 (1)PCR原理：在模闆DNA、引物(wù)和4種脫氧單核苷酸存在的條件下(xià)依賴于耐高溫的DNA聚合酶的酶促合成反應。以欲擴增的DNA做爲模闆，以和模闆正鏈和負鏈末端互補的兩種寡聚核苷酸做爲引物(wù)，經過模闆DNA變性、模闆引物(wù)複性結合、并在DNA聚合酶作用下(xià)發生(shēng)引物(wù)鏈延伸反應來合成新的模闆DNA。模闆DNA變性、引物(wù)結合(退火(huǒ))、引物(wù)延伸合成DNA這三步構成一(yī)個PCR循環.每一(yī)循環的DNA産物(wù)經變性又(yòu)成爲下(xià)一(yī)個循環的模闆DNA。這樣，目的的DNA的數量将以2年次方-2n的形式累積，在2小(xiǎo)時内可擴增30(n)個循環，DNA量達原來的上百萬倍

 (2)PCR過程：1. 模闆DNA的變性：模闆DNA經加熱至95℃左右一(yī)定時間後，DNA雙鏈被解離(lí)爲單鏈并遊離(lí)于溶液中(zhōng)的過程;2. 模闆DNA與引物(wù)的退火(huǒ)(複性)：人工(gōng)合成的一(yī)對引物(wù)在适合的溫度下(xià)(通常50-65℃)分(fēn)别與模闆DNA需要擴增區域的兩翼進行準确配對結合的過程;3. 引物(wù)的延伸:在适當的溫度下(xià)(通常70~75℃),以三磷酸脫氧核糖核苷(dNTP)爲反應原料,DNA模闆--引物(wù)結合物(wù)在TaqDNA聚合酶的作用下(xià)，單鏈核苷酸從引物(wù)的3’末端摻入,沿靶序列模闆,按堿基配對與半保留複制原理，合成一(yī)條新的與模闆DNA鏈互補的半保留複制鏈

重複循環變性--退火(huǒ)--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留複制鏈”，而且這種新鏈又(yòu)可成爲下(xià)次循環的模闆.每完成一(yī)個循環需2一(yī)4分(fēn)鍾，在一(yī)個由計算機控制的循環加熱器上經過三十個循環，就可以把原來的樣品精确地擴增了2的30次方倍.PCR特點:快速,準确,安全檢測病原體(tǐ)。

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